PCR檢測(cè)試劑盒利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取豬偽狂犬病毒DNA，以此為模板，在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性，低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異的DNA的片段拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過(guò)30次循環(huán)，使擴(kuò)增的DNA的片段放大數(shù)百萬(wàn)倍。將擴(kuò)增的DNA的片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后在紫外燈照射下，肉眼可見DNA的片段的擴(kuò)增帶，進(jìn)而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
PCR檢測(cè)試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1.根據(jù)DHBV的保守序列設(shè)計(jì)的引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī)PCR高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5.足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
PCR檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)步驟：
1.核酸提取
樣品進(jìn)行適當(dāng)處理后，可采用核酸提取試劑盒，該試劑盒可用于對(duì)樣本中病毒RNA的提取，請(qǐng)按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。也可選擇其他合適的商品化產(chǎn)品。
2.擴(kuò)增試劑的準(zhǔn)備
將各試劑按照用量加入無(wú)菌離心管中，充分混勻，短暫離心后在PCR反應(yīng)管中分別加入18μL混合液。
3.加樣
將制備好的樣本，陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照各取2μL分別加入對(duì)應(yīng)反應(yīng)管中，加完后蓋緊PCR反應(yīng)管蓋，置于PCR儀上。
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